這篇論文介紹了一種用于定量分析人血漿中綠原酸（Chlorogenic acid）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）方法，并將其應(yīng)用于中國(guó)晚期實(shí)體腫瘤患者的藥代動(dòng)力學(xué)研究。

研究背景

1、綠原酸是一種由咖啡酸和奎寧酸形成的脫羧酸，常見(jiàn)于咖啡、綠茶和一些中藥中。綠原酸具有抗炎、抗氧化和清除自由基的作用，并顯示出有效的抗癌活性。然而，目前缺乏一種簡(jiǎn)單、快速且可靠的定量分析方法來(lái)研究綠原酸在人體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)。

2、現(xiàn)有的LC-MS/MS方法存在一些缺點(diǎn)，如需要大量血漿樣本、復(fù)雜的提取系統(tǒng)和較長(zhǎng)的分析時(shí)間，這些都限制了綠原酸在臨床應(yīng)用中的研究。

3、之前的研究主要集中在同時(shí)測(cè)定綠原酸與其他化合物，但這些方法在血漿樣本需求量、提取復(fù)雜性和分析時(shí)間上存在不足。

研究方法

1、開發(fā)了一種簡(jiǎn)單、快速且特異的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血漿中的綠原酸。使用新綠原酸作為內(nèi)標(biāo)，血漿樣本用甲醇沉淀處理。

2、色譜分離在Zorbax C18柱上進(jìn)行，流動(dòng)相為含0.1%甲酸的甲醇-水梯度洗脫，流速為0.4 mL/min。

3、質(zhì)譜檢測(cè)在負(fù)離子模式下進(jìn)行，采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，綠原酸和內(nèi)標(biāo)的MRM轉(zhuǎn)換均為m/z 353.2 → 191.2。

4、方法在10-2000 ng/mL濃度范圍內(nèi)進(jìn)行了全面驗(yàn)證，日內(nèi)和日間精密度（RSD%）均在10.7%以內(nèi)，準(zhǔn)確度（RE%）在-3.0%到10.6%之間。

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1、標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作溶液的制備：綠原酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和工作溶液在不同濃度下制備，并存儲(chǔ)在-30°C。

2、樣本處理：血漿樣本與內(nèi)標(biāo)和甲醇混合后，經(jīng)過(guò)渦旋和離心處理，最終上機(jī)分析。

3、方法驗(yàn)證：包括選擇性、校準(zhǔn)曲線性能、準(zhǔn)確度、精密度、稀釋完整性、靈敏度、攜帶效應(yīng)、穩(wěn)定性、回收率和基質(zhì)效應(yīng)等方面的驗(yàn)證。

結(jié)果與討論

1、提取方法優(yōu)化：選擇甲醇作為沉淀劑，因其能提供更干凈的色譜圖，并在樣本制備過(guò)程中加入0.1%甲酸以提高綠原酸的穩(wěn)定性。

2、內(nèi)標(biāo)選擇：新綠原酸被選為內(nèi)標(biāo)，因其結(jié)構(gòu)與綠原酸相似，且在MRM通道中沒(méi)有顯著干擾。

3、LC-MS/MS方法優(yōu)化：負(fù)離子模式提供了更強(qiáng)的信號(hào)強(qiáng)度，最終選擇了甲醇-水（0.1%甲酸）系統(tǒng)作為流動(dòng)相。

4、方法驗(yàn)證結(jié)果：日內(nèi)和日間精密度和準(zhǔn)確度均在可接受范圍內(nèi)，稀釋完整性和靈敏度也符合要求。攜帶效應(yīng)和基質(zhì)效應(yīng)在可接受范圍內(nèi)，穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果表明綠原酸在不同條件下具有良好的穩(wěn)定性。

臨床應(yīng)用

1、該方法成功應(yīng)用于中國(guó)晚期實(shí)體腫瘤患者注射用綠原酸（CAFI）后的藥代動(dòng)力學(xué)研究。

2、11名受試者接受了不同劑量的CAFI注射，血液樣本在不同時(shí)間點(diǎn)采集并分析。

3、結(jié)果顯示，綠原酸在體內(nèi)中度吸收，平均達(dá)峰時(shí)間為1小時(shí)，快速消除，半衰期為1小時(shí)。多次給藥后沒(méi)有明顯積累，顯示出良好的安全性。

總體結(jié)論

開發(fā)了一種簡(jiǎn)單、特異、快速的LC-MS/MS方法，用于定量分析人血漿中的綠原酸。該方法已成功應(yīng)用于中國(guó)晚期實(shí)體腫瘤患者的藥代動(dòng)力學(xué)研究，提供了重要的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，為進(jìn)一步研究CAFI在腫瘤患者中的應(yīng)用提供了指導(dǎo)。

文獻(xiàn)鏈接